RT-PCR試劑盒使用注意事項

　　RT-PCR試劑盒逆轉(zhuǎn)錄和PCR在同一反應(yīng)體系中進行，反應(yīng)過程中無需添加試劑，無需打開管蓋，在避免污染的同時提高了檢測靈敏度和實驗效率。本試劑盒包括全新高效逆轉(zhuǎn)錄酶、快速熱啟動DNA聚合酶，同時包含適用于逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴增的反應(yīng)緩沖液和實驗中所需的反應(yīng)組分。經(jīng)過重組表達的SuperRT逆轉(zhuǎn)錄酶RNaseH活性缺失，減少了逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中RNA的降解，更容易獲得全長的cDNA。

　　該逆轉(zhuǎn)酶逆轉(zhuǎn)錄效率高，可對少量RNA模板進行良好的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。SuperRT逆轉(zhuǎn)錄酶與RNA親合性高，能通讀GC含量高，二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA模板，獲得高產(chǎn)量的cDNA。PCR反應(yīng)使用的DNA聚合酶具有擴增效率高、延伸速度快的優(yōu)良性能。*的緩沖體系使逆轉(zhuǎn)錄酶和聚合酶同時發(fā)揮功效。使用該試劑盒能夠方便快捷的在同一個反應(yīng)管內(nèi)完成逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴增反應(yīng)。使用本試劑盒擴增得到的目的產(chǎn)物3′端附有一個″A″堿基，可直接用于T/A克隆。

　　RT-PCR試劑盒注意事項：

　　1.用于cDNA合成反應(yīng)的溶液試劑盡量可能用DEPC進行處理，并在高壓滅菌后使用。有些試劑不能高壓滅菌時，首先用經(jīng)過滅菌的器具、水等配制溶液后，再將溶液進行過濾除菌處理。

　　2.RNA樣品要避免基因組DNA污染。

　　3.避免多次反復(fù)凍融RNA，使RNA保持在冰浴中處融化狀態(tài)。

　　4.試劑盒的各組成成分應(yīng)在-20℃保存。

　　5.cDNA產(chǎn)物應(yīng)置于-20℃保存。

　　RT-PCR試劑盒合理配備了與cDNA鏈合成反應(yīng)相關(guān)的各種組分，該試劑盒中的TIANScriptM-MLV具有高效的逆轉(zhuǎn)錄酶活性，對后續(xù)的PCR或定量PCR實驗兼容性好，適合于各種PCR耐熱聚合酶。